143B人骨肉瘤細胞培養(yǎng)條件與操作規(guī)范：
 

　　1. 培養(yǎng)基與環(huán)境
 

　　基礎培養(yǎng)基：DMEM或MEM，補充10%胎牛血清(FBS)、1%雙抗(青霉素/鏈霉素)。
 

　　培養(yǎng)條件：37℃、5% CO?、飽和濕度，培養(yǎng)箱濕度建議70%-80%。
 

　　容器適配：T25瓶(8-10mL培養(yǎng)基)、10cm皿(12-15mL)，根據(jù)細胞密度調整換液頻率(每2-3天一次)。
 

　　2. 關鍵操作步驟
 

　　復蘇：
 

　　37℃水浴快速解凍，離心(1000rpm，3-5min)去除凍存液。
 

　　新鮮培養(yǎng)基重懸后接種，次日觀察細胞貼壁情況。
 

　　傳代：
 

　　密度達80%-90%時，用0.25%胰酶-EDTA消化1-2分鐘，顯微鏡下觀察細胞間隙變大即終止消化。
 

　　傳代比例1:2至1:4，輕柔吹打避免氣泡，維持細胞活性。
 

　　凍存：
 

　　凍存液配方：90% FBS + 10% DMSO，密度0.5-1×10?細胞/mL。
 

　　程序降溫盒-80℃過夜后轉液氮，需復蘇驗證活性。
 

　　3. 質量控制
 

　　鑒定與檢測：定期進行STR鑒定和支原體檢測，確保遺傳背景穩(wěn)定且無污染。
 

　　狀態(tài)監(jiān)測：傳代后鏡檢并拍照記錄，觀察細胞形態(tài)及碎片情況，及時清理死細胞。