293細(xì)胞的另一生長(zhǎng)特性是貼壁所需時(shí)間長(zhǎng)且貼壁不牢。細(xì)胞冷凍后復(fù)蘇時(shí),都有不同程度的腫脹,若以50ml培養(yǎng)瓶待細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的70%～80%時(shí)消化凍存,復(fù)蘇時(shí)將其全部接種至2個(gè)50ml瓶中時(shí)較為合適。剛復(fù)蘇的293貼壁很慢，復(fù)蘇接種后24小時(shí)內(nèi),應(yīng)盡量減少觀察細(xì)胞次數(shù)或不作觀察,以免因晃動(dòng)而影響細(xì)胞貼壁。復(fù)蘇后48小時(shí)左右觀察貼壁情況并進(jìn)行更換培養(yǎng)基比較合適,如果用一次性塑料培養(yǎng)瓶可增加細(xì)胞貼壁牢度。換液前宜將培養(yǎng)基預(yù)熱。
 

　　293細(xì)胞傳代：倒去廢液，PBS洗一次(輕)，用0.02%EDTA與0.25%Trypsin消化，生長(zhǎng)良好細(xì)胞，培養(yǎng)瓶中輕搖,使之流遍所有細(xì)胞表面,即將其吸除或棄去消化30s，然后吸去，再讓剩下的EDTA/Trypsin作用30s,鏡下觀察細(xì)胞變圓,就可加DMEM終止消化，反復(fù)吹打至細(xì)胞全成單個(gè)懸浮細(xì)胞即可。12小時(shí)-24小時(shí)90%以上細(xì)胞貼壁。293細(xì)胞傳代時(shí)機(jī)為達(dá)80-90%匯合，傳代比例為1：3。
 

　　293細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)：
 

　　1、用大瓶培養(yǎng)較小瓶要好，可能是更有利于293均勻的分布，利于營(yíng)養(yǎng)的攝取。
 

　　2、培養(yǎng)液要新鮮，每次只配1000ml，分為2-4瓶，不用的培養(yǎng)液，凍存在-20度。
 

　　3、要及時(shí)傳代，建議是細(xì)胞基本鋪滿培養(yǎng)瓶底部，但是細(xì)胞之間還沒有貼緊，總是多少有空隙的時(shí)候好。
 

　　4、如果細(xì)胞貼壁不好，可能是消化過久，或是培養(yǎng)瓶不夠干凈，當(dāng)然要除外細(xì)胞污染。
 

　　5、如果使用用玻璃培養(yǎng)瓶或皿，可以采用高壓滅菌的0.2%明膠溶液預(yù)處理培養(yǎng)瓶/培養(yǎng)皿，方法是將明膠加入培養(yǎng)皿，使之浸泡到底面的各個(gè)部分，然后吸出，置超凈臺(tái)內(nèi)晾干即可使用。這樣處理后細(xì)胞貼壁效果好且鏡下細(xì)胞立體感強(qiáng)。如果是新的塑料培養(yǎng)瓶就不用處理。