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人正常肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟

更新時間:2021-11-04瀏覽:935次

  我們現(xiàn)在所知道的地球上的生命,人類、動物、植物,還有肉眼看不見的微觀世界,這些林林總總的生命體都是由細(xì)胞所組成的。所以,生命體如何繁衍、變化、進化,組成紛繁復(fù)雜的大千世界,全都是依靠這些細(xì)胞在工作。細(xì)胞也有各式各樣不同的分類,其中有一類細(xì)胞它很特殊,而且擁有其他細(xì)胞不具有的一項重要功能——不斷繁衍、自我復(fù)制、自我更新。這類細(xì)胞就是干細(xì)胞。
  人正常肝細(xì)胞培養(yǎng)步驟:
  1)培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:
  1.準(zhǔn)備培養(yǎng)基;
  2.培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%;
  3.凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
  2)細(xì)胞處理:
  復(fù)蘇細(xì)胞:將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入lOcm皿中,加入約8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達80%-90%即可進行傳代培養(yǎng)。
  對于貼壁細(xì)胞,傳代可參考以下方法:棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。2ml消化液于培養(yǎng)瓶中,置于37°C培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加l-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

 

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